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1. 使用前先配制10%的过硫酸铵溶液（APS），称取0.1g APS于离心管中加入1 mL的去离子水，混匀后置于2-8℃备用；

注：配制好的APS溶液于4℃可以保存1周，-20℃可以保存2个月。

2. 配制分离胶：取等量的分离胶A液和B液混匀备用；配制浓缩胶：取等量的浓缩胶A液和B液混匀备用；（A液和B液的推荐用量详见后表）

3. 在制备的分离胶和浓缩胶中分别按照100：1的比例加入10%的APS溶液（1ml凝胶混合液中加入10μL10%的APS溶液），混匀过程中避免产生气泡；

4. 固定好制胶板，顺一边用移液器缓慢加入分离胶，注意避免流速过快而产生气泡，液面距离制胶板短板上沿1.5cm左右时停止，缓慢加入水密封压实液面，等待凝固后倒掉水，继续加满配制好的浓缩胶，插入梳齿等待凝固。

注：也可无需等待分离胶凝固，继续注入配制好的浓缩胶，最后插入梳齿等待凝固，但从跑胶效果看还是推荐分步凝固。制备好的凝胶放入加有少量电泳缓冲液的密封袋中，可于 4℃存放数周。

5. 观察电泳状况和转膜效率：将整块凝胶浸泡于缓冲液中，放置在免染成像仪上，使用紫外光激发（发光的激发波长为345-356nm，发射波长为500nm）2-5min后即可观察和拍照记录电泳和转膜情况。